DNA测序仪的注意事项
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1．abi prism 310基因分析仪是高档精密仪器，需专人操作、管理和维护。
2．本实验测序pcr反应的总体积是5μl，而且未加矿物油覆盖，所以pcr管盖的密封性很重要，除加完试剂后盖紧pcr管盖外，最好选用pe公司的pcr管。如pcr结束后pcr液小于4～4.5μl，则此pcr反应可能失败，不必进行纯化和上样。
3．作为测序用户来说，只需提供纯化好的dna样品和引物，一个测序pcr反应使用的模板不同，需要的dna量也就不同，pcr测序所需模板的量较少，一般pcr产物需30～90ng，单链dna需50～100ng，双链dna需200～500ng，dna的纯度一般是a260nm/a280nm为 1.6～2.0，最好用去离子水或三蒸水溶解dna，不用te缓冲液溶解。引物用去离子水或三蒸水配成3.2pmol/μl较好。
4．本实验使用的测序试剂盒是bigdye荧光标记终止底物循环测序试剂盒，一般可测dna长度为650bp左右。本仪器dna测序精确度为 (98.5±0.5) %，仪器不能辨读的碱基n<2%，所需测定的长度超过了650bp，则需设计另外的引物。为保证测序更为准确，可设计反向引物对同一模板进行测序，相互印证。对于n碱基可进行人工核对，有时可以辨读出来。为提高测序的精确度，根据星号提示位置，可人工分析该处彩色图谱，对该处碱基作进一步核对
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为了保证DNA测序仪实验的正常进行，DNA测序仪在使用过程中要注意一些容易出现的问题，下面小编带大家了解一下DNA测序仪的注意事项。
1.注意样品的纯度。PCR具有短时间内高效的扩增能力，因此样品的纯度对DNA测序仪反应有至关重要的影响。当样品不纯的时候，那些杂质会对实验结果产生干扰。这在PCR产物测序中表现的尤为明显，在测序结果上表现为峰图杂乱，过多的不可识别的碱基；
2.注意样品的量。尽管DNA测序反应可以高效的扩增待测得模板，使得测序所需要的模板量大大降低，但是当最低限度的模板量也不能提供的话，会引起测序反应的异常，表现为无反应，峰图弱，或者反应中断等；
3.注意样品的形式。这里专指纯化的PCR产物和质粒样品。正常情况下，溶解样品时常用的溶液有以下几种形式：水，Tris溶液，TE（Tris—EDTA）三种。当采用TE为溶剂的时候由于溶液中的EDTA可以干扰测序反应的进行，因此实验人员在进行测序时需要注意样品的溶解方式；
4.注意样品的形式：从DNA测序角度来讲最好是由实验者提供菌液的形式，由公司来提取质粒，这样可以保证DNA样品的数量和质量。如果实验者提供的是质粒或者是纯化后的PCR产物，则需要说明其浓度和溶解的方式；
5.注意PCR产物。若是PCR产物进行测序时，需要实验者同时提供PCR的双向引物各10ul（浓度>5uM/ul），这是因为PCR的引物要求与测序的引物有所不同，因此不能保证一条PCR引物就能够测成功。双向引物可以在一条引物无法测序的情况下，改用另一端的引物测序。（已纯化）浓度>50ng/μl、体积>10μl；（未纯化）浓度>100ng/μl、体积>30μl；引物要求：浓度>5uM、体积>10μl；
6.质粒产物。需要提供明确的质粒名称，大小、浓度以及测序所用的引物名称，如果是自带引物测序（条件同PCR测序），最好也能够标明反应的条件。质粒的大小对于测序也有着一定的影响。样品中，质粒的总量不低于5ug；
7.菌液。需要明确的标明所用的抗生素类型和培养条件，以便样品能够培养和扩增。
综上，关于DNA测序仪注意事项的内容就是这些了，大家在使用DNA测序仪进行实验时，要注意以上几点事项，一定没有问题的。
