巨噬细胞移动抑制因子对HL-1细胞T型钙电流的调控

・６２６・　Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｊｏｕｍａｌ　ｏｆ　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２０１３，Ｖｏｌ　１９，Ｎｏ　５　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９６８８．２０１３．０５．０２７　・实验研究・　巨噬细胞移动抑制因子对ＨＬ一１细胞Ｔ型钙电流的　调控△　林泽生　，邓春玉２，３，饶芳２，３，吴书林，，余细勇２，３，杨敏。一，邝素娟。，单志新　，朱杰宁　（１．广东省人民医院药学部广东省医学科学院，广州５１００８０；２．广东省人民医院医学研究中心广东省医　学科学院，广州５１００８０；３．广东省心血管病研究所广东省人民医院广东省医学科学院，广州５１００８０）　摘要：目的观察巨噬细胞移动抑制因子（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ，ＭＩＦ）对心房肌细胞Ｔ型钙电流　（Ｔ—ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎＢｅｌ　ｃｕｒｒｅｎｔ，　）的调控。方法的表达。结果使用全细胞膜片钳和分子生物分析方法检测心房肌细胞　在体外培养的心房肌细胞株（ＨＬ一１细胞）中，小鼠重组ＭＩＦ（２０、４０　ｎｍｏｌ／Ｌ，２４　ｈ）可明显抑　制　．　的峰值电流，与对照组比较，差异均有统计学意义［峰值内向电流：（一１７．５￣２．９）ｐＡ／ｐＦ　ｖｓ．（一２７．９±　３．４）ｐＡ／ｐＦ，Ｐ＜０．０５；（一１１３±１．７）ｐＡ／ｐＦ　ｖｓ．（一２７．９±３．４）ｐＡ／ｐＦ，Ｐ＜０．叭］；并可损伤电压依赖的　，Ｔ激活，使Ｔ型　钙通道　１Ｇ和　ｌＨ亚单位ｍＲＮＡ表达下调。而ｓｒｃ非特异性抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ和特异性抑制剂ＰＰ１可逆转　４０　ｎｍｏＷＬＭＩＦ所致的，ｃｄ　Ｔ下调［ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ：（一１ｌ＿３±１．７）ｐＡ／ｐＦ　ｕｓ．（一１６．１±０．８），Ｐ＜０．０５；ＰＰＩ：（一ｌｌ＿３±１．７）ｐＡ／ｐＦ　ｖｓ．（一１９．０±３．２）ｐＡ／ｐＦ，Ｐ＜Ｏ．０５］。结论号转导途径。　ＭＩＦ可能通过影响　参与心房颤动的病理过程，ｓｒｃ可能参与该信　关键词：心房纤颤；巨噬细胞移动抑制因子；Ｔ型钙电流；ＨＬ一１细胞　中图分类号：Ｒ　５４１．７　５　文献标志码：Ａ　文章编号：１００７—９６８８（２０１３）０５—０６２６—０６　Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　ｏｎ　Ｔ—ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌｓ　ｉｎ　ＨＬ－１　ｃｅｌｌｓ　ＬＩＮ　Ｚｅ—ｓｈｅｎｇ　，ＤＥＮＧ　Ｃｈｕｎ—ｙｕ　，ＲＡＯ　Ｆａｎｇ。一，ＷＵ　Ｓｈｕ—ｌｉｎ　，ＹＵ　Ｘｉ－ｙｏｎｇ　一，ＹＡＮＧ　Ｍｉｎ　，ＫＵＡＮＧ　Ｓｕ—　ｉｕａｎ　，ＳＨＡＮ　Ｚｈｉ—ｘｉｎ　，ＺＨＵ　Ｊｉｅ．ｎｉｎｇ　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１　００８０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１００８０，Ｃｈｉｎａ；３．Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１　００８０，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅｓ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ（ＭＩＦ）ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ—　ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌｓ（　Ｔ）ｉｎ　ａｔｉｒａｌ　ｍｙｏｃｙｔｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｗｈｏｌｅ—ｃｅｌｌ　ｖｏｌｔａｇｅ—ｃｌａｍｐ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｓｓａｙｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ　ｉｎ　ａｔｉｒａｌ　ｍｙｏｃｙｔｅｓ．　Ｒｅｓｄ￣　Ｉｎ　ａｔｒｉｕｍ－ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｙｏｃｙｔｅｓ（ＨＬ一１　ｃｅｉｌｓ）ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，ｍｏｕｓｅ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＭＩＦ（２０　ｏｒ　４０　ｎｍｏｌ／Ｌ，２４　ｈ）ｃｏｕｌｄ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔｌｙ　ｓｕｐｐｒｅｓｓ　ｐｅａｋ　．Ｔ　ｗｈｅｎ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ［（一１７．５±２．９）ｐＡ／ｐＦ　ｕｓ．（－２７．９±３．４）ｐＡ／ｐＦ，Ｐ＜０．０５；（一１１．３±１．７）ｐＡ／ｐＦ　ｓ．　（－２７．９±３．４）ｐＡ／ｐＦ，Ｐ＜Ｏ．０１］，ｉｍｐａｉｒ　ｔｈｅ　ｖｏｌｔａｇｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　．Ｔ　ａｎｄ　ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ｃｔｌＧ　ａｎｄ　ａｌＨ　ｍＲＮＡ　ｏｆ　Ｔ—ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ，ｃｄ　Ｔ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＭＩＦ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ　ｂｙ　ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ　ａｎｄ　ＰＰ１［ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ：（－１１．３＋１．７）ｐＡ／ｐＦ　ｙｓ．（一１６．１±０．８），Ｐ＜０．０５；ＰＰＩ：（一１１．３±１．７）ｐＡ／ｐＦ　ｕｓ．（一１９．０±３．２）ｐＡ／ｐＦ，Ｐ＜０．０５］．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　ＭＩＦ　ｍａｙ　ｂｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ａｔｉｒａｌ　ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ　ｂｙ　ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｔ　ｉｎ　ａｔｉｒｕｍ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｙｏｃｙｔｅｓ，ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　Ｓｒｃ　ｍａｙ　ｔａｋｅ　ｐａｒｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ　ｐａｔｈｗａｙ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｔｉｒａｌ　ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ；ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ；Ｔ—ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌ；ＨＬ一１　ｃｅｌｌｓ　△基金项目：国家自然科学基金资助项目（项目编号：Ｎｏ．８１００００８４）。　作者简介：林泽生（１９７６一），男，主管药师，研究方向为医院药学。　通信作者：饶芳。Ｅ－ｍａｉｌ：ｒａｏｆａｎｇ＠ｍｅｄｍａｉｌ．ｃｏｍ．ｃｎ　岭南心血管病杂志２０１３年９月第ｌ９卷第５期　心房颤动是最常见的心律失常之一，是脑卒　中、心力衰竭和死亡的主要危险因素，其发病机制　尚未得到很好阐明。已有研究表明，钙超载在心房　电重构中起重要作用［　。Ｌ型钙通道（Ｌ　ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌ，ＬＣＣ）是钙离子进入细胞的主要途径之一，　但钙离子亦可通过Ｔ型钙通道（Ｔ　ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌ，ＴＣＣ）进入心房肌细胞。ＴＣＣ并不表达于所　有的心脏组织。仅在窦房结。浦肯野纤维和心房肌　细胞中表达［ｚ－。ＴＣＣ可参与心脏的一些病理改变．　如压力过负荷所致的心肌肥厚。心肌梗死和心力衰　竭［２－４］。但近期的研究发现，Ｔ型钙电流（Ｔ　ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌ　ｃｕｒｒｅｎｔ，　Ｔ）可能也参与心房颤动　的发病。如与窦性心律（ＳＲ）患者相比，心房颤动患　者的心房肌组织中的ＴＣＣ　Ｃａｖ３．１表达明显下降　］。　且ＴＣＣ阻滞剂在预防长时间快速起搏所致的心房　重构中，比ＬＣＣ阻滞剂效果更好［　。因此，进一步阐　明ＴＣＣ在心房颤动发病机制中的作用具有重要意　义。此外，近十余年的研究发现，炎症在心房颤动的　发病中起重要作用ＥＴ］。而巨噬细胞移动抑制因子　（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ，ＭＩＦ）是一个　前炎症因子．可通过调节其他炎症因子的分泌参与　炎症反应。我们前期的研究发现．ＭＩＦ可通过调控Ｌ　型钙电流（Ｌ　ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌ　ｃｕｒｒｅｎｔ，　．Ｌ）参与　心房颤动的电重构ｌ８＿，但ＭＩＦ是否通过调控七．　参　与心房颤动的发病机制尚未见报道。因此，本研究　拟观察ＭＩＦ刺激对心房肌细胞　．　的调控，以及探　讨Ｓｒｃ激酶是否参与其信号途径。　１材料和方法　１．１　ＨＬ．１细胞的培养及分组　ＨＬ．１　ｃｅｉｌｓ获赠自Ｗｉｌｌｉａｍ　Ｃ｜ａｙｃｏｍｂ教授实验　室ｆ　Ｌｏｕｉｓｉａｎａ　Ｓｔａｔｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｃｅｎｔｅｒ。　Ｎｅｗ　Ｏｒｌｅａｎｓ．ＬＡ）。细胞培养于Ｃｌａｙｃｏｍｂ培养基　（ＪＲＨ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＫＳ），加入了１０％胎牛血清　（ＪＲＨ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＫＳ）、２　ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｌ一谷氨酰胺　（Ｇｉｂｃｏ）、１００　Ｉｘｍｏｌ／Ｌ去甲肾上腺素（Ｓｉｇｍａ，　ＵＳＡ）、１００　Ｕ／ｍＬ青霉素和１００　ｐ，ｇ／ｍＬ链霉素　（Ｇｉｂｃｏ），培养瓶使用纤连蛋白和凝胶预铺（Ｓｉｇｍａ，　ＵＳＡ），培养于３７％、５％二氧化碳、９５％空气的培养　箱中。每２４～４８　ｈ换液一次。将所培养的ＨＬ一１心房　肌细胞分为２０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ＭＩＦ刺激组、４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ＭＩＦ　刺激组及对照组，每组设６孔（ｎ＝６）。　１．２　ＭＩＦ刺激ＨＬ．１细胞表达　．　的方法　对培养的ＨＬ．１心房肌细胞予２Ｏ、４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　・６２７・　小鼠重组ＭＩＦ（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ＭＩＦ，ｒＭＩＦ）￣ＩＪ激２４　ｈ．　对照组予无药物刺激．记录一８０　ｍＶ至＋６０　ｍＶ的　全细胞　并计算电流密度。ＨＬ．１细胞可表达　．　和　＿Ｔ，计算５０个细胞，有大约１５％的ＨＬ—ｌ　细胞仅表达　．　（　．　几乎检测不到），而约有３９％　的细胞仅表达　．　，大约４２％的ＨＬ．１细胞可表达　．　和　在剩下的约４％的细胞几乎无电流表　达。因为非常难以从　．　中分离出　．　，因此，我们　只选择表达　．　的细胞用于分析ｒＭＩＦ对　．　的影　响。为了确定Ｓｒｃ是否是ＭＩＦ诱导的　．　抑制作用　的信号转导途径中的一员，我们在给予４０　ｎｍｏＬ／Ｌ　ｒＭＩＦ刺激前分别加入ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ（３０　ｐ，ｍｏｌ／Ｌ）或ＰＰ１　（１５￣ｍｏｌ／Ｌ），观察后两者是否可减轻ｒＭＩＦ诱导　的，ｃａ．　抑制。　１．３　ＲＮＡ提取和逆转录聚合酶链反应　ＨＬ一１细胞经处理后弃去培养基。预冷的磷酸　盐缓冲液洗３遍后．每孔加入８００　ｔｘＬ　ＴＲＩｚｏｌ，吹打后　混匀　移至１．５　ｍＬ的焦碳酸二乙酯（ｄｉｅｔｈｙｌ　ｐｙｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ。ＤＥＰＣ）预处理的ＥＰ管，提取总　ｍＲＮＡ。取１　Ｉｘｇ总ＲＮＡ逆转录Ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍ，Ｐｒｏｍｅｇａ）为ｃＤＮＡ。使用ＳＹＢＲ　Ｐｒｅｍｉｘ　Ｅｘ　ＴａｑＴＭ（ＴａＫａＲａ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎａ）进行扩增，每　个样本加入２　ｔｘＬ　ｃＤＮＡ，总体积为２５　Ｌ。在ＭＪ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ＤＮＡ　Ｅｎｇｉｎｅ　Ｏｐｔｉｃｏｎ￣２连续荧光检测系　统（ＭＪ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．）上进行实时定量聚合酶链　反应（ｒｅａ１．ｔｉｍｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ，　ｒｔＰＣＲ）。小鼠ＴＣＣ　ａｌＧ：正向引物序列为５’．ＣＧＣ　ＴＧＡ　ＧＴＣ　ＴＣＴ　ＣＴＧ　ＧＴＹ　ＴＧＴ　Ｃ．３’，反向引物序列　为５’．ＴＧＣ，ＩＴｒＡ　ＣＡＴ　ＧＧＧ　ＡＣＴ　ＴＩ］ｒ　ＣＡＧ　Ａ．３’：小　鼠ＴＣＣ　ｏＨＨ：正向引物序列为５’　ＴＧＡ　ＡＣＣ　ＣＡＧ　ＡＧＴ　ＴＴＣ　ＣＴＣ　Ｔ．３’．反向引物序列为５’　ＡＣＡ　ＡＣＴ　ＴＣＴ　ＧＧＴ　ＧＧＴ　ＧＧＴ一３’。Ｂ．ａｃｔｉｎ：正向引物序　列为５　．ＴＧＴ　ＣＣＣ　ＴＧＴ　ＡＴＧ　ＣＣＴ　ＣＴＧ　ＧＴ一３　，反向　引物序列为５　．ＧＡＴ　ＧＴＣ　ＡＣＧ　ＣＡＣ　ＧＡＴ　ＴＹＣ　Ｃ．　３　。通过２一一计算相对表达水平　。为了进一步　观察ＭＩＦ是否是通过调节ＴＣＣ的表达来调节　＿Ｔ，　我们使用定量ＰＣＲ检测２０　ｎｍｏｌ／Ｌ和４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　的ｒＭＩＦ刺激２４　ｈ后的ＴＣＣ　ｅｄＨ和ｃｄＧ　ｍＲＮＡ表　达，以Ｂ—ａｃｔｉｎ作为内参。　１．４全细胞膜片钳技术记录　．　的方法　ＨＬ一１细胞经干预后，接种于３５　ｍｍ培养皿　中，弃去培养基，予０．０５％胰蛋白酶一乙二胺四乙　酸（ＥＤＴＡ）消化约２　ｍｉｎ，加入Ｏ．０２５％胰蛋白酶抑　制剂和培养基终止消化，细胞在６　ｈ内用于电生　・６２８・　Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２０１３，Ｖｏｌ　１９，Ｎｏ　５　理实验。全细胞膜片钳技术记录　ｍ细胞外液　（ｍｍｏｌ／Ｌ）：ＴＥＡ—Ｃ１　１４０，ＣａＣ１２　５，ＭｇＣ１２　２，ＨＥＰＥＳ　Ｖ）／Ｓ］｝，ＶＯ．５为最大激活电压的一半，Ｖ是测试　电位，Ｓ是斜率因子。电压依赖的稳定状态的失活　关系通过标准的两个脉冲方案来检测，１　０００　ｍｓ预　适应脉冲．前置电压一４０　ｍＶ，从一１００　ｍＶ到一２Ｏ　ｍＶ，　然后用４００　ｍｓ检测脉冲至一２０　ｍＶ。失活曲线适用　于Ｂｏｌｔｚｍａｎｎ方程：Ｉ／Ｉｍａｘ＝１／｛１＋ｅｘｐｆ（Ｖ—ＶＯ．５）／　１０，和Ｇｌｕｃｏｓｅ　１０（ｐＨ　７．４）。玻璃电极由硼硅玻璃　毛细管（Ｃｏｍｉｎｇ　７７４０，１．２　ｍｍ　ＯＤ）拉制而成。充满　细胞内液后电极尖端电阻为２－３　ｎＭ。细胞内液　（ｍｍｏｌ／Ｌ）：ＣｓＣ１　１００，ＴＥＡ－Ｃ１　２０，Ｎａ２ＡＴＰ　５，Ｎａ２ＧＴＰ　０．４，ＥＧＴＡ　１０，ＨＥＰＥＳ　１０（ｐＨ　７．２）。　ｓ］｝，Ｖ０．５是最大失活电压的半值，Ｖ是前置脉冲　电位，Ｓ是斜率因子。　在液接电位补偿后用负压使电极与细胞表面　形成高阻封接后（阻抗１　Ｇ），在接触细胞前，补偿　尖端电位。给负压破膜，形成全细胞记录。　Ａｘｏｐａｔｃｈ　２００Ｂ放大器，Ｄｉｇｉｄａｔａ　１２００Ｂ—ｐＣｌａｍｐ　７．０　ｄａｔａ．ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ（Ａｘｏｎ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＳＡ）记　失活后时间依赖七．　的复活使用配对脉冲方　案来研究（Ｐ　，Ｐ２）。Ｐ２（Ｉ　）间的电流相对于Ｐ　（Ｉ　）　的电流测定为Ｐ　一Ｐ　问期的函数。复活的时程适　用于指数函数。　录电流信号。５　ｋＨｚ过滤信号，储存于电脑的硬盘　中。串联电阻（Ｒｓ）为３～５　Ｍｎ，电补偿７０％～８０％　１．５统计学分析　用ＳＰＳＳ　１　１．０统计软件分析。计量资料以（　）　表示，两组问的比较使用ｔ检验，多组间均数比较用　ＡＮＯＶＡ方差分析。以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。　ｄ／《　０　２结　果　以使在记录电流和钳夹的膜上电压下降时电容激　增缩小至最小，并在电流记录过程中保持稳定。为　了避免细胞体积所致的差异，所有数据均以电流　密度表示。实验在２５℃±１　左右进行。　电压依赖的　激活可通过其Ｉ～Ｖ关系由　ｇ／ｇｍａｘ来测定。ｇ／ｇｍａｘ和膜电位之间的关系适用　于Ｂｏｌｔｚｍａｎｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ：ｇ／ｇｍａｘ＝１／｛１＋ｅｘｐｌ（ＶＯ．５一　２．１各组ＨＬ一１细胞　．Ｔ表达比较　给予ｒＭＩＦ刺激后２４　ｈ可使ＨＬ一１细胞　表达明显下降。与对照组相比，２０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ　Ｌ～　Ｏ　；冒＋６０　ｎＶ　蠢鲁　售量里基一８Ｏ　■Ｅ■■■一　ＩＩ１Ｖ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ（ｍＶ）　－ｃ　６０　８０　—６０　．４０　．２０　Ｏ　２０　４０　３０　３５　－图１各组ＨＬ－１细胞　，Ｔ表达比较［Ａ图表示对照组、４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ组及ｒＭＩＦ＋抗ＭＩＦ抗体组（１：５Ｏ０）处理２４　ｈ后　Ｉ．Ｖ曲线；Ｃ图表示抗　的降低；直方图表示对照组、２０　ｎｍｏＩ／Ｌ　ｒＭＩＦ组、４０　ｎｍ０１／Ｌ　ｒＭＩＦ组　的全细胞电流，插入的为电压方案；Ｂ图表示对照组和２０　ｎｍｏｌ／Ｌ组、４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ组处理后　ＭＩＦ抗体可抑制ｒＭＩＦ诱导的ＨＬ一１心房肌细胞的　和４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ＋抗ＭＩＦ抗体组的　．　．　峰值电流密度］　注：与对照组比较，　Ｐ＜０．０５，一Ｐ＜０．Ｏ１；与４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ组比较，Ｐ＜Ｏ．ｏｌ　岭南心血管病杂志２０１３年９月第１９卷第５期　・６２９・　组和４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ组分别使ＨＬ．１细胞　．　表　达下降约３８％和６０％，差异有统计学意义ｆ峰值　内向电流：（一１７．５±２．９）ｐＡ／ｐＦ　ＵＳ．（一２７．９±３．４）　ｐＡ／ｐＦ，Ｐ＜Ｏ．０５；（一Ｉ１．３±Ｉ．７）ｐＡ／ｐＦ　ｓ．（－２７．９±　（一３２．４±１．５）ｍＶ　ｓ．（一３７．７＋０．８）ｍＶ，Ｐ＜０．０１］。详　见图２Ａ。　２．３　３组ＨＬ．１细胞　．　失活到复活的时程比较　２０　ｎｍｏｌ／Ｌ和４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ刺激的ＨＬ．１细　胞　．　３．４）ｐＡ／ｐＦ，Ｐ＜Ｏ．Ｏ１］，详见图１Ｂ。此外，ｒＭＩＦ可　使　的最大电流的峰值电压从一２０　ｍＶ移至一１０　ｍＶ。同时，４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ诱导的　．Ｔ的降低可　被给予抗ＭＩＦ抗体（１：５００稀释）所取消『峰值内　向电流：（一１１．３±１．７）ｐＡ／ｐＦ（４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ组）　的失活到复活的时程与对照组比较，差异　无统计学意义［（１１４．１　．２）ｍｓ　（１１６．１±８．７）　ｍｓ，Ｐ＞０．０５；（１２７．３±９．５）ｍｓ　Ｖ．Ｓ．（１１６．１－－－８．７）ｍｓ，Ｐ＞　０．０５］，详见图２Ｂ。　２．４　３组ＨＬ一１细胞ＴＣＣ　ａｌＨ和ａｌＧ　ｍＲＮＡ定量　５．（一１８．０±１．３）ｐＡ／ｐＦ（４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ＋抗ＭＩＦ　抗体组），Ｐ＜０．０５］，而且抗ＭＩＦ抗体本身对　．　无　影响，见图１Ａ、图１Ｃ。　ＰＣＲ检测结果比较　定量ＰＣＲ检测结果显示，与对照组相比，　４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ可使ＴＣＣ　ｔｘｌＨ和ｏｄＧ　ｍＲＮＡ表　达明显下降，差异有统计学意义（ＴＣＣ　ａｌＧ：１．００＿＋０　ｓ．０．５５±０．１２，Ｐ＜Ｏ．０５；ｅｔｌＧ　ｍＲＮＡ：１．００＿０　ｓ．０．４３±　２．２　３组ＨＬ一１细胞　．　的电压依赖失活改变比较　２０　ｎｍｏｌ／Ｌ和４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ刺激的ＨＬ．１　细胞　．　的电压依赖失活改变与对照组比较，差　０．１７，Ｐ＜Ｏ．０５），见图３。　异无统计学意义［平均Ｖ　／２：（一３７．１±１．１）ｍＶ吼　（一３６．０±２．６）ｍＶ，Ｐ＞Ｏ．０５；（一３７．３±２．３）ｍＶ　ＶＳ．　（一３６．０±２．６）ｍｖ，Ｐ＞０．０５］　但２０　ｎｍｏｌ／Ｌ和　２．５　ＰＴＫｓ抑制剂可减轻ｒＭＩＦ诱导的　．　的降低　在给予ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ（３０＆ｍｏ］／Ｌ）或ＰＰＩ（１５　ｔｘｍｏｌ／Ｌ）　后，４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ诱导的ＨＬ一１细胞的　．　表达　降低可得到改善，其峰值内向电流值比较，差异有　统计学意义［ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ：（－１１．３＋１．７）ｐＡ／ｐＦ　ＵＳ．（一　１６．１±０．８），Ｐ＜０．０５；ＰＰＩ：（－１１．３±１．７）ｐＡ／ｐＦ　ｓ．（一　４０　ｎｍｏｌ／Ｌ　ｒＭＩＦ刺激可使激活曲线明显右移，与　对照组比较，差异有统计学意义［相应的Ｖ　值：　（一３０．８±２．０）ｍＶ　ＵＳ．（一３７．７±０．８）ｍＶ，Ｐ＜Ｏ．０ｌ；　Ａ　Ｂ　鲁至至｜ｌＬ　＿Ｒ０　ｖ　ｖ　冗　Ｐ１　Ｐ２　１．０　－８　１．０　８　６　。６　４　．４　ｌ，Ｌ　ｒＭＩＦ　ｌ，Ｌ　ｒＭＩＦ　２　２　Ｏ．０　－８０　－６０　－４０　－２０　０　０．０　０　１００　２ｏ０　３ｏ０　４００　５００　Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎａｌ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ（ｍＶ）　ＡＴ（ｍｓ）　图２　３组ＨＬ－１细胞的　．　通道功能比较［Ａ图表示失活曲线和用于评价电压依赖的屯　失活的电压方案，为３组　ＨＬ—ｌ细胞的电压依赖的　．　失活和复活，曲线适用于Ｂｏｈｚｍａｎｎ函数；Ｂ图表示３组ＨＬ—ｌ细胞　从失活到复活的时　程，数据适用于ｍｏｎｏｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ函数］　岭南心血管病杂志２０１３年９月第１９卷第５期　・６３１　・　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｔｅｎｃｉｅｓ　ｆｏｒ　Ｔ－－ａｎｄ　Ｌ－・ｔｙｐｅ　ｃｈａｎｎｅｌｓ　ｉｎ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ　认为ＴＣＣ在快速起搏的电重构中起着重要作用。　本研究发现ＨＬ．１细胞中，ｒＭＩＦ可抑制　．　，　呈浓度依赖性。同时可抑制　．　的稳定状态的激　活，而不影响失活和复活。此外，高浓度的ｒＭＩＦ可　明显抑制ＴＣＣｏｄＨ和ｅｔｌＧ的ｍＲＮＡ的表达。提示　ａｔｉｒｌａ　ｅｌｅｃｔｉｒｃａｌ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００４，　４４（３）：３８６—３９２．　　ａ１．Ｈｉｇｈ—　［７］　ＰＥＮＡ　Ｊ　Ｍ，ＭＡＣＦＡＤＹＥＮ　Ｊ，ＧＬＹＮＮ　Ｒ　Ｊ，ｅｔｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　Ｃ—ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ｓｔａｔｉｎ　ｔｈｅｒａｐｙ，ａｎｄ　ｒｉｓｋｓ　ｏｆ　ａｔｉａｌｒ　ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：ａｎ　ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ　ｎａｌａｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＪＵＰＩＴＥＲ　ｔｉｒａｌ［Ｊ］．Ｅｕｒ　ｈｅａｒｔ　Ｊ，２０１２，３３（４）：５３１－５３７．　ｒＭＩＦ可能通过直接影响ＴＣＣ的通道基因表达来　调控　从而参与心房颤动电重构。　［８］　ＲＡＯ　Ｆ，ＤＥＮＧ　Ｃ　Ｙ，ＷＵ　Ｓ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｓｒｃ　ｉｎ　Ｌ—　ｔｙｐｅ　Ｃａ２　ｃｈａｎｎｅｌ　ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｍｉｇｒａｔｉｏｎ　蛋白酪氨酸激酶（ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｋｉｎａｓｅ，ＰＴＫ）　参与许多激素和生长因子受体介导的有丝分裂或　细胞生长的信号转导。此外，这些酶也参与多种细　胞离子通道的调控，如平滑肌细胞和心肌细胞的　ＬＣＣＩ　一９１。研究表明ＰＴＫｓ抑制剂——ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ和　Ｓｒｃ抑制剂——ＰＰ１可明显激活人心房肌细胞的　／ｃａ．　，Ｓｒｃ可能通过调控　．　来参与心房颤动的形　成。然而，Ｓｒｃ是否调控ＴＣＣ，尚未见研究报道。在　本研究中．我们发现Ｓｒｃ的非特异性抑制剂——　ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ和特异性抑制剂——ＰＰ１可逆转ｒＭＩＦ诱　导的　．　抑制，提示Ｓｒｃ可能参与ＭＩＦ对　．　调　控的信号转导途径。　因此，本研究的结果提示ｒＭＩＦ可能通过影响　ＴＣＣ参与心房颤动的病理过程．Ｓｒｃ可能参与该信　号转导途径。　参考文献：　ＳＵＮ　Ｈ，ＣＨＡＲＴＩＥＲ　Ｄ，ＬＥＢＬＡＮＣ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｇｅｓ　ａｎｄ　ｔａｃｈｙｃａｒｄｉａ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ　ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃａｎｉｎｅ　ａｔｉｒａｌ　ｍｙｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ　ｒｅｓ，２００１，　４９（４）：７５１—７６１．　［２］　ＥＲＴＥＬ　Ｓ　Ｉ，ＥＲＴＥＬ　Ｅ　Ａ，ＣＬＯＺＥＬ　Ｊ　Ｐ．Ｔ—ｔｙｐｅ　Ｃａ２　ｃｈａｎｎｅｌｓ　ａｎｄ　ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｂｌｏｃｋａｄｅ：ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ［Ｊ３．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　Ｄｒｕｇｓ　Ｔｈｅｒ，１９９７，１　１（６）：７２３—　７３９．　［３］　ＨＵＡＮＧ　Ｂ，ＱＩＮ　Ｄ，ＤＥＮＧ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ—ｔｙｐｅ　Ｃａ２　ｃｈａｎｎｅｌ　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｉｎ　ｐｏｓｔ—ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ　ｒｅｍｏｄｅｌｅｄ　ｒａｔ　ｌｅｔｆ　ｖｅｎｔｉｒｃｌｅ［Ｊ］．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０００，４６（３）：　４４２—４４９．　［４］　ＩＺＵＭＩ　Ｔ，ＫＩＨＡＲＡ　Ｙ，ＳＡＲＡＩ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ—ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌｓ　ｂｙ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ一１　ｉｎ　ｆａｉｌｉｎｇ　ｈｅａｒｔｓ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ａｄｕｌｔ　ｒａｔ　ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ　ｍｙｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００３，　１０８（２Ｏ）：２５３０－２５３５．　［５］　ＧＡＢＯＲＩＴ　Ｎ，ＳＴＥＥＮＭＡＮ　Ｍ，ＬＡＭＩＲＡＵＬＴ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ａｔｉｒａｌ　ｉｏｎ　ｃｈａｎｎｅｌ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ　ｓｕｂｕｎｉｔ　ｇｅｎｅ—ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｖａｌｖｕｌａｒ　ｈｅａｒｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ａｎｄ　ａｔｒｉａｌ　ｉｆｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００５，１１２（４）：４７１—４８１．　［６］　ＯＨＡＳＨＩ　Ｎ，　ＭＩＴＡＭＵＲＡ　Ｈ，ＴＡＮＩＭＯＴＯ　Ｋ，　ｅｔ　ａ１．Ａ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌ　ｂｌｏｃｋｉｎｇ　ｄｒｕｇｓ　ｗｉｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｆａｃｔｏｒｉｎ　ａｔｉｒａ／ｍｙｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．ＪＭｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｃａｒｄｉｏｌ，２００９，　４７（５）：５８６—５９４．　［９］　ＬＩＶＡＫ　Ｋ　Ｊ，　ＳＣＨＭＩＴＴＧＥＮ　Ｔ　Ｄ．Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｄａｔａ　ｕｓｉｎｇ　ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ　ａｎｄ　ｔｈｅ　２（一　Ｄｅｌｔａ　Ｄｅｌｔａ　Ｃ（Ｔ））Ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００１，２５（４）：４０２－　４０８．　［１Ｏ］　ＨＡＧＩＷＡＲＡ　Ｓ，ＯＺＡＷＡ　Ｓ，ＳＡＮＤ　０．Ｖｏｌｔａｇｅ　ｃｌａｍｐ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｉｎｗａｒｄ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｇｇ　ｃｅｌｌ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｏｆ　ａ　ｓｔａｒｆｉｓｈ［Ｊ］．Ｊ　Ｇｅｎ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９７５，６５（５）：６１７—６４４．　［１１］　ＢＥＡＮ　Ｂ　Ｐ．Ｔｗｏ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌｓ　ｉｎ　ｃａｎｉｎｅ　ａｔｒｉｌａ　ｃｅｌｌｓ．　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｉｎ　ｋｉｎｅｔｉｃｓ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄ　ｐｈａｍｒａｃｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｇｅｎ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９８５，８６（１）：１—３０．　［１２］　ＮＩＬＩＵＳ　Ｂ，ＨＥＳＳ　Ｐ，ＬＡＮＳＭＡＮ　Ｊ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｔｙｐｅ　ｏｆ　ｃｒａｄｉａｃ　ｃｌａｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌ　ｉｎ　ｖｅｎｔｉｆｃｕｌａｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９８５，　３１６（６０２７）：４４３—４４６．　［１３］　ＰＥＲＥＺ—ＲＥＹＥＳ　Ｅ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｌｏｗ—ｖｏｌｔａｇｅ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｔ－ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｈａｎｎｅｌｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌ　Ｒｅｖ，２００３，８３（１）：１１７—　１６１．　［１４］　ＹＡＮＧ　Ｚ，ＳＨＥＮ　Ｗ，ＲＯＴＹＭＡＮ　Ｊ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｒａｐｉｄ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｃａｕｓｅｓ　ｅｌｅｃｔｉｒｃａｌ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ａｔｉｒａｌ　ｍｙｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｃａｒｄｉｏｌ，２００５，３８（２）：２９９－３０８．　［１５］　ＹＯＫＯＳＨＩＫＩ　Ｈ，ＳＵＭＩＩ　Ｋ，ＳＰＥＲＥＬＡＫＩＳ　Ｎ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌ—　ｔｙｐｅ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｉｎ　ｒａｔ　ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｉｎａｃｔｉｖｅ　ａｎａｌｏｇ，ｄａｉｄｚｅｉｎ［Ｊ］．　Ｊ　Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｃａｒｄｉｏｌ，１９９６，２８（４）：８０７－８１４．　［１６］　ＳＣＨＲＯＤＥＲ　Ｆ，ＫＬＥＩＮ　Ｇ，ＦＲＡＮＫ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｓｒｃ　ｆａｍｉｌｙ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｋｉｎａｓｅｓ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｓｉｎｇｌｅ　Ｌ－ｔｙｐｅ：Ｃａ　ｃｈａｎｎｅｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ａｔｒｉａｌ　ｍｙｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｏｌ　Ｃｅｌｌ　Ｃａｒｄｉｏｌ，２００４，３７（３）：　７３５－７４５．　［１７］　ＫＡＴＳＵＢＥ　Ｙ，ＹＯＫＯＳＨＩＫＩ　Ｈ，ＮＧＵＹＥＮ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　０ｆ　Ｃａ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｉｎ　ｎｅｏｎａｔａｌ　ａｎｄ　ａｄｕｌｔ　ｒａｔ　ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ　ｍｙｏｃｙｔｅｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｋｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，　１９９８，３４５（３）：３０９－３１４．　［１８］　ＧＲＥＩＳＥＲ　Ｍ，ＨＡＬＡＳＺＯＶＩＣＨ　Ｃ　Ｒ，ＦＲＥＣＨＥＮ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ａｌｔｅｒｅｄ　ｓｒｃ　ｋｉｎａｓｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉ　（Ｃａ，Ｌ）ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ａｔｒｉｌａ　ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎａｕｎｙｎ　Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ　Ａｒｃｈ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００７，３７５（６）：３８３－３９２．　［１９］　ＨＵ　Ｘ　Ｑ，ＳＩＮＧＨ　Ｎ，ＭＵＫＨＯＰＡＤＨＹＡＹ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｏｌｔａｇｅ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　Ｃａ　ｃｈａｎｎｅｌｓ　ｉｎ　ｒａｂｂｉｔ　ｃｏｌｏｎｉｃ　ｓｍｏｏｔｈ　ｍｕｓｃｌｅ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｃ—Ｓｒｃ　ｎａｄ　ｆｏｃａｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｋｉｎａｓｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，　１９９８，２７３（９）：５３３７—５３４２．　（收稿日期：２０１３—０４—０８）